鲜乳中抗生素残留检验

2014.01.23

随着人们对食品安全问题的逐步关注，长期饮用抗生素残留超标乳制品可能引起的菌群失调、产生耐药性。该问题已引起消费者和乳品生产企业的高度重视。虽然我国《生鲜牛乳收购标准》中并未对抗生素残留作出要求，但绝大部分乳品生产企业在原料乳收购环节都已开展抗生素残留检测工作。

TTC法，即氯化三苯基四氮唑法，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法（GB5409.85）。样品经80℃杀菌后加入嗜热链球菌菌液。培养一段时间后加入TTC( 2,3,5-氯化三苯四氮唑），若样品中不含抗菌素或其浓度低于检测限，试验菌繁殖，TTC被还原，试验溶液变成红色。

1.原理

类别	名称	CAS	最大残留限量MRL
β-内酰胺类磺胺类四环素类氨基糖苷类大环内酯类氯霉素类氟喹诺酮类	头孢氨苄青霉素G 阿莫西林磺胺二甲嘧啶土霉素链霉素红霉素氯霉素恩诺沙星	15686-72-2 69-57-8 61336-70-7 57-68-1 2058-46-0 3810-74-0 114-07-8 56-75-7 93106-60-6	100 4 4 100 100 200 40 不得检出 100

根据待测牛奶的着色情况判定是否有抗菌素存在。该法简便、快速，无需特殊设备，2h～3 h可见报告。检测各种抗生素所用的TTC法试验的灵敏度(最低检出量)分别为：青霉素0．004U／mL，链霉素0．5 U／mL，庆大霉素0．4 U／mL，卡那霉素5 U／mL。

2.材料和方法

2.1 材料

恒温水浴锅：36±1℃；无菌移液管：1ml，10ml；无菌试管：18mm*180mm；待测样品2；菌种：嗜热链球菌；阴性、阳性对照；4%TTC（2,3,5-氯化三苯四氮唑）水溶液；青霉素G参照溶液。

2.2 方法

2.2.1 活化菌种

取一环嗜热链球菌菌种，接种在9ml灭菌脱脂乳中，36±1℃恒温培养12~15h，置2~5℃冰箱保存备用，每15d转接一次。

2.2.2 测试菌液

将经活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱乳，36±1℃培养15±1h，加入同体积灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。

2.2.3培养

取样品9ml，置18mm*180mm试管内，每份样品另外做一份平行样。同时再做阴性和阳性对照各一份，阳性参照用9ml青霉素G参照溶液，阴性用9ml灭菌脱脂乳。所有试管置80±2℃水浴加热5 min。冷却至37℃以下。加入测试菌液1 mL，轻轻旋转试管混匀。36±℃水浴培养2 h。加质量分数为4％的TTC水溶液0.3 mL。在涡旋混匀器上混合15 S或振动试管混匀。36±1℃水浴避光培养30 min．观察颜色变化如果颜色没有变化．于水浴中继续避光培养30 min最终观察。观察时要迅速．避免光照过久出现干扰。

3.判断方法

在白色背景前观察，试管中样品呈乳的原色时。指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。试管中样品呈红色为阴性结果如最终观察现象仍为可疑，建议重新检测.

4.结果与分析

4.1 报告

样品管均变为红色，抗生素残留阴性。

4.2 分析

以上实验结果表明，该方法操作简便易行，而且前处理方法简便，检测结果准确可靠。最终观察时，样品管、阴性对照均变为红色，但阳性样也呈现微红。经各组对比发现多数人试验后阳性管变红，也有阳性管保持不变的。经推测可能原因为阳性样未摇匀或青霉素G含量较低造成的

4.3 讨论

目前国内外普遍采用的检测牛乳中抗生素残留的方法主要分为微生物测定法、理化检验法和免疫检测法。本次试验采用的TTC法属于微生物检测法，其他还有SNAP法，色谱法、ELISA法等。

牛奶及奶制品中的抗生素问题一直是一个敏感的话题，国际和国家标准中已做了明确规定。但是现实生产环节中，抗生素残留问题的确存在，且潜在的危害着广大消费者的健康。这就要求我们今后大力开发非抗生素类添加剂；建立和完善快速有效的检测方法；行业内严格按照标准收购、生产、销售牛奶及奶制品，杜绝不符合标准的奶流人市场；提高我国奶品的质量，符合WTO的质量技术要求，提高奶品企业自身产品的竞争力，促进我国奶业向国际化方向发展。