抗菌肽对大肠杆菌K12D31和金黄色葡萄球菌抑菌效果比较

2014-03-26

因为食品安全的需要和抗生素在中国滥用的问题，抗生素作为预防药物在动物饲料上的使用正越来越受到限制，因此替代或减少抗生素的饲料添加剂受到追捧，如植物精油、酸化剂等。抗菌肽是近年最受关注的抗菌物质，大部分抗菌肽抗菌具有广谱性，而且能提高动物的免疫力。目前市场上的抗菌肽产品很多，产品鱼龙混杂、使用效果相差较大，为了验证这些抗菌肽的真实抗菌效果，我们进行了本次试验。

1、材料与方法

1.1 抗菌肽产品

收集了市场上的5种抗菌肽产品（或具有抗菌性的产品），分别是肽力生、TSS、FLT、APT和KLS。

1.2 试验设计

1.2.1 LB培养基

NaCl 1%、蛋白胨 1%、酵母粉 0.5%、葡萄糖 0.5%、琼脂粉 2%（固体培养基添加），将上述培养基配比并以水为溶剂，调节pH至7.0，121℃灭菌20 min。

1.2.2 抗菌肽水溶液

准确称量待测样品1.000 g，溶解于9.00 mL蒸馏水中，10000 rpm离心10 min获得上清即为抗菌肽水溶液。

1.2.3 器材和设备

打孔器（Ф=6 mm）、移液枪（50 μL、200 μL）、平底培养皿（Ф=9 cm）、超净工作台。

1.3 评估步骤

1.3.1 指示菌菌液的制备

将待检测指示菌划斜面活化培养（例如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌37℃培养16~18 h），挑取1~2环于液体培养基中（250 ml三角瓶装液量为100 ml），置于摇床37℃、180转培养12~16 h（观察培养液浑浊即可），该培养液即为指示菌菌液。

1.3.2 带菌平板的制备

将固体LB培养基融化并恒温至55℃，加入已经制备好的指示菌菌液100 μL并摇匀，配制成带菌琼脂培养基。取灭菌的平底培养皿，倒入带菌琼脂培养基约20 mL，置于超净台桌面冷却凝固。

1.3.3 打孔点样和抑菌圈测量

用灭菌的打孔器在已制备好的带菌琼脂平板上打孔，孔径为6 mm，吸取待测样品20 μL加入打好的琼脂孔内，置于37℃培养箱培养16~18 h，用游标卡尺量取抑菌圈直径，直径越大表明抑菌性越强。

2、结果

表1不同抗菌肽产品对大肠杆菌K12D31的抑菌效果（单位：mm）

产品名称	KLS	TSS	APT	肽力生	FLT
1	-	隐约	-	8.5	8.7
2	-	隐约	-	8.9	8.8
3	-	隐约	-	8.5	9.0
平均值	-		-	8.63	8.83

由表1可知，KLS和APT对大肠杆菌K12D31没有任何抑菌效果，而TSS隐约有抑菌圈，但边界不明显，不能完全抑制。肽力生和FLT有很明显的抑菌圈，抑菌直接分别是8.63mm和8.83mm，二者差不多，FLT稍好。

表2 不同抗菌肽产品对金黄色葡萄球菌的抑菌效果（单位：mm）

产品名称	KLS	TSS	APT	肽力生	FLT
1	-	隐约	-	6.5	4.9
2	-	隐约	-	6.9	4.8
3	-	隐约	-	6.7	5.0
平均值	-		-	6.7	4.9

由表2可知，KLS和APT对金黄色葡萄球菌没有任何抑菌效果，而TSS隐约有抑菌圈，但边界不明显，不能完全抑制。肽力生和FLT有很明显的抑菌圈，抑菌直接分别是6.7mm和4.9mm，肽力生的抑菌直径比FLT明显要大。

3、结论

KLS和APT对两种致病菌均没有抑菌效果，TSS具有一定的抑菌效果，但是不足以杀灭致病菌，所以具有隐约的透明圈。FLT和肽力生对这两种致病菌均有较好的抑菌效果，其中FLT对大肠杆菌的抑菌效果较肽力生稍好，但FLT对金黄葡萄球菌的透明圈边缘并不是十分清晰，其对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要远远低于肽力生。